Die Stadt- und Pfarrkirche St. Marien ist das älteste Gebäude der Stadt und zählt zu den UNESCO-Welterbestätten. In dieser Kirche predigte der Reformator Martin Luther.
Eine Projektion von Lutherzitaten erinnert an den ehemaligen Standort der Lutherkanzel, die als Leihgabe im Lutherhaus zu sehen ist. Luthers Weggefährte Johannes Bugenhagen war der erste evangelische Stadtpfarrer in Wittenberg und verfasste viele Kirchenordnungen für den Fortgang der Reformation in Norddeutschland und Nordeuropa.
In der Stadtkirche lassen sich viele kunsthistorische Zeugnisse auch aus der Reformationszeit entdecken, vor allem aus der Werkstatt von Lucas Cranach.